骨形态发生蛋白2及碱性成纤维生长因子2对大鼠骨髓间充质干细胞膜片增殖和成骨分化的影响

文题释义： 细胞膜片技术：是在体外接种培养高密度的细胞，使其相互融合生长至100%而形成的透明致密膜状物。该技术不需要胰酶消化即可收集细胞，因此保留了大量的胞外基质、细胞间连接以及细胞-基质连接等结构。目前细胞膜片技术已成为组织工程领域的研究热点，已被推广应用于牙周膜、角膜、心脏、软骨、食管等多种组织器官修复。 成骨细胞：主要由内外骨膜和间充质始祖细胞分化而来，在复杂的骨形成过程中发挥着主要的功能，承担着骨基质的合成、分泌和矿化。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，能定向分化为成骨细胞，其成骨分化过程可受多种因素的影响，如细胞因子的调控、遗传因素和激素水平等。背景：现阶段骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2对骨髓间充质干细胞膜片增殖、成骨分化的影响和作用机制还尚未可知，如何将生长因子与组织工程细胞膜片技术相整合，最终将其用于骨缺损修复具有重要意义。 目的：探讨单独及联合应用骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2对骨髓间充质干细胞膜片增殖和成骨分化的影响。 方法：体外分离培养鉴定SD大鼠骨髓间充质干细胞并构建细胞膜片，选用不同质量浓度的骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2单独及联合诱导骨髓间充质干细胞膜片，CCK-8法结合碱性磷酸酶活性检测确定2种因子促进膜片增殖和成骨分化的最佳有效质量浓度；然后对骨髓间充质干细胞膜片进行成骨诱导，通过大体及显微镜观察、Vonkossa染色、茜素红染色、RT-PCR检测相关成骨标志物来评估诱导效果。 结果与结论：单独应用骨形态发生蛋白2可增强骨髓间充质干细胞膜片的碱性磷酸酶活性，最佳质量浓度为100 μg/L(P < 0.001)，单独应用碱性成纤维生长因子2能加速骨髓间充质干细胞膜片的增殖，最佳质量浓度为20 μg/L(P < 0.001)，而联合应用既可以促进膜片增殖又能提高其碱性磷酸酶活性(P < 0.001)；经成骨诱导后，4组膜片在形态学上无明显差异，均能诱导骨髓间充质干细胞膜片的成骨分化，其中联合组钙结节最明显(P < 0.001)，可显著促进膜片晚期成骨分化并抑制其早期成骨分化，具有明显的协同促进作用(P < 0.001)。结果表明，骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2联合应用时具有协同作用，既可以促进骨髓间充质干细胞膜片增殖，又能显著增强其成骨诱导能力。ORCID: 0000-0003-1918-579X(何惠宇) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程     

Increased IL-10/IL-17 ratio is aggravated along with the prognosis of patients with chronic lymphocytic leukemia

ObjectiveThis study is to investigate the association between the Treg/Th17 cells and prognosis of chronic lymphocytic leukemia (CLL).MethodsTotally 50 CLL patients and 20 Health controls were included in this study. Regulatory T (Treg) cells and the cell subset secreting IL-17 (Th17) in peripheral blood were detected with flow cytometry. Serum levels of IL-10 and IL-17 were determined with ELISA, and expression of Foxp3 and RORγt was assessed with quantitative real-time PCR.ResultsTreg and Th17 cell proportions in peripheral blood in the CLL patients were significantly higher than control. Serum levels of IL-10 and IL-17, and expression of Foxp3 and RORγt, were significantly increased in the CLL patients. Ratios of Treg/Th17 and IL-10/IL-17 were significantly elevated in the CLL patients. Compared with those before treatment, Treg/Th17 and IL-10/IL-17 ratios were declined in the CLL patients in remission. Compared with the non-remission group, Treg cells were significantly decreased, while Th17 cells were significantly increased, resulting in decreased Treg/Th17 ratio, in the remission group. Moreover, the serum IL-10 level was significantly decreased, while the serum IL-17 level was significantly increased, resulting in declined IL-10/IL-17 ratio, in the remission group. Correlation analysis showed that, Treg and Th17 cell counts were significantly associated with CD38 and ZAP-70 expression in the CLL patients. Moreover, the IL-10/IL-17 ratio was also significantly associated with CLL prognostic factors.ConclusionAltered Treg/Th17 and IL-10/IL-17 ratios in CLL would be aggravated along with the disease progression, which might be used as indicators for the disease prognosis.     

硫化氢对肝硬化大鼠肝脏survivin表达的影响

目的:探讨抗凋亡因子存活素(survivin)在硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)干扰的肝硬化大鼠肝脏中的表达量,了解H2S在肝硬化过程中可能的作用机制.方法:♀SD大鼠经复合因素法复制肝硬化模型,造模结束后随机分为S组、P组、C组,分别腹腔注射硫氢化钠(sodium hydrogen sulfide,NaSH)56mg/(kgd)、炔丙基甘氨酸(Propargylglycine,PPG)30mg/(kgd)及等量生理盐水,用敏感硫电极法检测肝硬化大鼠门静脉中H2S的量,用免疫组织化学及realtime-PCR检测大鼠肝脏survivin蛋白及mRNA表达.结果:S组、P组与C组相比,门静脉血浆内H2S浓度显著改变(51.19mol/L±8.75mol/L,68.97mol/L±2.69mol/Lvs134.49mol/L±12.25mol/L,P<0.05),肝硬化H2S增加组大鼠survivin蛋白及mRNA表达显著增加(P<0.05),肝硬化大鼠体内H2S与survivin表达有相关性.结论:在大鼠肝硬化模型中,随着体内H2S浓度的变化,survivin蛋白及mRNA表达发生变化,这可能是H2S调节肝硬化作用过程中的机制之一.     

降气和胃通腑法对肠癌患者术后胃肠功能及免疫功能的影响

目的:观察针灸和中药恢复肠癌术后患者胃肠功能和免疫功能的临床疗效.方法:将肠癌根治性手术后的105例患者随机分成对照组、中药组和针灸组,各35例.对照组给予术后常规处理;中药组给予术后常规处理和术后第1天营养管推入四磨汤口服液20mL,每日3次,治疗10 d;针灸组给予术后常规处理和术后第1天针灸治疗,每日1次,治疗1...     

9型腺相关病毒转染乳鼠心肌细胞的可行性及安全性

背景：9型腺相关病毒对心肌细胞具有更好的靶向转染,是目前研究基因治疗心脏疾病的理想载体。目的：探索9型腺相关病毒体外转染乳鼠心肌细胞的可行性及对乳鼠心肌细胞的毒性评估。方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞,以携带荧光蛋白基因的9型腺相关病毒为载体,将分离纯化的乳鼠心肌细胞分为正常培养组、无病毒转染组、病毒转染组。结果与结论：第1周细胞搏动频率及百分率正常培养组和病毒转染组与无病毒转染组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,但正常培养组高于病毒转染组（P〈0.05）;3周后各组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。经9型腺相关病毒转染的心肌细胞24h开始有表达,4~6d荧光最强,3组细胞72h内不同时间点还原比率均接近于1.0。说明9型腺相关病毒能成功有效地转染乳鼠心肌细胞,对乳鼠心肌细胞无明显毒性作用。     

循环胆固醇及其相关基因变异在早发型阿尔茨海默病中的作用及机制

早发型阿尔茨海默病（EOAD）是65岁之前发病的以进行性认知障碍及行为异常为特征的神经系统退行性疾病。作为常染色体显性遗传疾病，EOAD的发病机制主要与基因突变有关。研究表明胆固醇及其相关基因变异参与EOAD发病。胆固醇可能通过载脂蛋白E基因ε4等位基因（ApoE ε4）介导促进EOAD发生，也可能是EOAD独立于ApoE ε4的危险因素，具体作用机制尚不明确。对EOAD患者进行基因检测发现，与胆固醇代谢相关的载脂蛋白A1（ApoA1）基因、载脂蛋白B（ApoB）基因、载脂蛋白C1（ApoC1）基因、载脂蛋白C2（ApoC2）基因、载脂蛋白D（ApoD）基因、载脂蛋白E（ApoE）基因、三磷酸腺苷结合盒A1转运蛋白（ABCA1）基因、三磷酸腺苷结合盒A2转运蛋白（ABCA2）基因、三磷酸腺苷结合盒A7转运蛋白（ABCA7）基因、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）基因、分拣蛋白相关受体1（SORLl）均与EOAD有关。现将胆固醇及相关基因变异在EOAD发病机制中的作用做一综述，旨在为EOAD早期诊断提供临床思路，为EOAD的治疗提供新的靶点。     

SD大鼠羊水间充质干细胞向神经样细胞体外诱导分化

目的:探讨体外诱导羊水间充质干细胞(AF-MSCs)分化成神经干细胞.方法:10只SD怀孕大鼠,180-240 g,胎龄16d,过量腹腔麻醉致死,开腹全部切除子宫,在无菌的条件下抽取全羊水,采用贴壁法分离AF-MSCs,体外培养扩增,观察细胞生长特性,流式细胞仪检测AF-MSCs表面抗原表达及细胞周期.取第3代AF-MSCs,加入预诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、1 mmol/Lβ-MEM)诱导24 h,然后加入诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、5 mmol/L β-MEM)诱导24 h,最后在分化维持培养液(DMEM/F12、20μg/L EGF、20μg/L bFGF)中培养,行免疫荧光染色,检测NSE和GFAP的表达.结果:成功分离、培养和传代SD大鼠AF-MSCs,流式细胞术检测提示大鼠AF-MSCs的G0/G1期细胞比例约为87.5%、S+G2+M期比例为12.5%,表达CD44为98.3%、GD29为70%、和CD105为33.2%、不表达CD45为0.5%,CD34为1%,DLA-DR(MHC class Ⅱ)为0.1%.诱导后,AF-MSCs能表达神经细胞标示物NSE和GFAP,且可在体外继续存活2 wk左右.结论:羊水中也存在MSCs,与其他来源的MSCs特点相符:羊水可以作为一种新的胎儿MSCs来源,而且能在体外诱导分化为神经细胞.     

仓鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合过程中糜蛋白酶的表达

背景：肥大细胞糜蛋白酶在烧伤创面表达的研究较少。 目的：观察肥大细胞糜蛋白酶是否存在于烫伤创面以及深Ⅱ度烫伤后不同时间点的表达变化。 方法：应用75 ℃的水接触仓鼠背部皮肤12 s制备深Ⅱ度烫伤创面(病理组织学证实)。分别于烫伤前及烫伤后1，3，7，14 d取烫伤组织进行试验。 结果与结论：实时定量RT-PCR及放射免疫 检测结果显示烫伤后创面组织中糜蛋白酶mRNA表达量和活性均有所增高，在烫伤后第3天最高。表明肥大细胞糜蛋白酶在烧伤创面有所表达，并可能参与了烧伤损伤愈合过程。     

2型糖尿病患者血清维生素D水平变化的分析

目的比较2型糖尿病患者与血糖正常者体内血清25-羟维生素D(25-OH Vit D)水平的差异,分析25-羟维生素D与2型糖尿病的关系。方法选择2013年7月~2014年11月在我科住院的2型糖尿病患者50例为病例组,同期在我科住院的血糖正常者60例为对照组。测定25-OH Vit D及相关临床生化指标并统计分析。结果血清25-OH Vit D在病例组和对照组中存在统计学差异(P<0.05),血清25-OH Vit D与空腹血糖呈负相关(P<0.05)。结论血清25-OH Vit D在2型糖尿病患者中低于血糖正常者。且血清25-OH Vit D与空腹血糖呈负相关,即空腹血糖越高,血清25-OH Vit D越低。     

Comparison of the efficacy and safety of the adalimumab biosimilar TQ-Z2301 and adalimumab for the treatment of Chinese patients with active ankylosing spondylitis: a multi-center,randomized, double-blind,phase III clinical trial

Clinical Rheumatology - To assess the clinical equivalence of TQ-Z2301, a biosimilar of adalimumab, to the reference adalimumab in the treatment of Chinese patients with active ankylosing...